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UCF.ME<sup>?</sup> T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)
- 品牌:翌圣生物
- 產(chǎn)地:
- 供應商報價:面議
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
更新時間:2024-12-24 09:03:45
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銷售范圍售全國
入駐年限第1年
營業(yè)執(zhí)照已審核
- 同類產(chǎn)品mRNA疫苗與藥物(117件)
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詳細介紹
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體T7 RNA聚合酶,以含有T7啟動子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動子下游的反向單鏈DNA互補的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板,因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。
注:G*為RNA轉錄的第一個堿基。
本品是按照GMP工藝要求生產(chǎn),產(chǎn)品以無菌液體形式提供。
產(chǎn)品性質(zhì)
來源(Source)
重組E. coli
最適溫度(Optimum Temperature)
37℃
宿主核酸殘留(Host nucleic acid residue)
<10 fg/U
宿主蛋白殘留(Host protein residue)
<50 ppm
病原體(HBV/ HCV/HIV)檢測
無檢出
RNA酶殘留(RNase residue)
陰性
內(nèi)毒素殘留(Endotoxin residue)
<0.05EU/1000U
支原體檢測(Mycoplasma detection)
無檢出
無菌檢測(Sterility testing)
無檢出
儲存緩沖液(Storage Buffer)
50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%(v/v)甘油,pH7.9@25℃
活性單位定義(Unit Definition)
在 37℃、pH8.0 的條件下,1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位。
注:具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標請查看批次質(zhì)檢報告
產(chǎn)品組分
編號
組分
產(chǎn)品編號/規(guī)格
10613ES92
(10 KU)
10613ES97
(50 KU)
10613ES98
(500 KU)
10613ES99
(5000 KU)
10613-A
T7 RNA polymerase (1 KU/μL)
10 μL
50 μL
500 μL
5 mL
10613-B
10×Transcription Buffer
100 μL
500 μL
1 mL×5
10 mL×5
注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT,但不含有NTP,如需請購買本公司NTP set solution 10133。
產(chǎn)品應用
1. 單鏈 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各類RNA前體,以及同位素標記或非同位素標記的RNA探針)
2. 以(Cap analog)為引物合成Capped mRNA
運輸和保存方法
干冰運輸。-20℃保存,有效期一年。
應用實例
1、按下列體系配制反應體系
組分
體積(μL)
終濃度
10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)
2
1×
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)
0.4 each
2 mM each
T7 RNA Polymerase (1 KU/μL)
0.5-1
-
RNase inhibitor (40 U/μL)
1
-
RNase free H2O
Up to 18
-
模板DNA
2 (100 ng-1μg)
-
【注】:
①. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺,亞精胺濃度過高會引起DNA模板沉淀。
②. Buffer和水建議放置到室溫,然后開始使用,反應于室溫下配制,防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
③.若轉錄長度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。
④. RNase inhibitor (40 U/μL)請購買本公司產(chǎn)品10603。
⑤.為了特定區(qū)域的有效轉錄,建議在其區(qū)域下游把模板DNA預先切成平端或5′突出末端。2、37℃反應1-2 h(若轉錄長度≤ 100 nt,增加時間至4-8 h)。
3、反應結束后,使用2 U DNaseⅠ(無RNase)37℃、15 min去除DNA模板。
4、轉錄產(chǎn)物純化:體外轉錄產(chǎn)物可選用RNA Cleaner磁珠進行純化(12602),以去除蛋白、鹽離子和其他雜質(zhì)。也可以采用酚/氯仿純化法(具體操作步驟可聯(lián)系Yeasen索?。?/span>
注意事項
1、DNA模板的種類:推薦使用含T7啟動子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。
2、轉錄模板的純度會顯著影響體外轉錄反應。在質(zhì)粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會顯著影響轉錄RNA的質(zhì)量。通過酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板;PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。
3、在20 μL反應體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無機焦磷酸酶可顯著提高轉錄產(chǎn)量。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
HB211021
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