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    UCF.ME<sup>?</sup> T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)

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    詳細介紹

     

     

    產(chǎn)品描述

     

    本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體T7 RNA聚合酶,以含有T7啟動子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動子下游的反向單鏈DNA互補的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板,因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。

    注:G*RNA轉錄的第一個堿基。

    本品是按照GMP工藝要求生產(chǎn),產(chǎn)品以無菌液體形式提供。 

     

    產(chǎn)品性質(zhì)

     

    來源(Source)

    重組E. coli

    最適溫度(Optimum Temperature)

    37℃

    宿主核酸殘留Host nucleic acid residue

    <10 fg/U

    宿主蛋白殘留Host protein residue

    <50 ppm

    病原體(HBV/ HCV/HIV)檢測

    無檢出

    RNA酶殘留(RNase residue

    陰性

    內(nèi)毒素殘留Endotoxin residue

    <0.05EU/1000U

    支原體檢測Mycoplasma detection

    無檢出

    無菌檢測Sterility testing

    無檢出

    儲存緩沖液(Storage Buffer)

    50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%v/v)甘油,pH7.9@25℃

    活性單位定義(Unit Definition)

    在 37℃、pH8.0 的條件下,1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位。

    注:具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標請查看批次質(zhì)檢報告

     

    產(chǎn)品組分

     

    編號

    組分

    產(chǎn)品編號/規(guī)格

    10613ES92

    (10 KU)

    10613ES97

    (50 KU)

    10613ES98

    (500 KU)

    10613ES99

    (5000 KU)

    10613-A

    T7 RNA polymerase (1 KU/μL)

    10 μL

    50 μL

    500 μL

    5 mL

    10613-B

    10×Transcription Buffer

    100 μL

    500 μL

    1 mL×5

    10 mL×5

    注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2100 mM DTT,但不含有NTP,如需請購買本公司NTP set solution 10133

     

    產(chǎn)品應用

     

    1. 單鏈 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各類RNA前體,以及同位素標記或非同位素標記的RNA探針)

    2. 以(Cap analog)為引物合成Capped mRNA

     

    運輸和保存方法

     

    干冰運輸。-20℃保存,有效期一年。

     

    應用實例

     

    1、按下列體系配制反應體系

    組分

    體積(μL)

    終濃度

    10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)

    2

    CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)

    0.4 each

    2 mM each

    T7 RNA Polymerase (1 KU/μL)

    0.5-1

    -

    RNase inhibitor (40 U/μL)

    1

    -

    RNase free H2O

    Up to 18

    -

    模板DNA

    2 (100 ng-1μg)

    -


    . DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺,亞精胺濃度過高會引起DNA模板沉淀。
    . Buffer和水建議放置到室溫,然后開始使用,反應于室溫下配制,防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
    .若轉錄長度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。
    . RNase inhibitor (40 U/μL)請購買本公司產(chǎn)品10603。
    .為了特定區(qū)域的有效轉錄,建議在其區(qū)域下游把模板DNA預先切成平端或5′突出末端。

    2、37℃反應1-2 h(若轉錄長度≤ 100 nt,增加時間至4-8 h)。

    3、反應結束后,使用2 U DNaseⅠ(無RNase)37℃、15 min去除DNA模板。

    4、轉錄產(chǎn)物純化體外轉錄產(chǎn)物可選用RNA Cleaner磁珠進行純化(12602),以去除蛋白、鹽離子和其他雜質(zhì)。也可以采用酚/氯仿純化法(具體操作步驟可聯(lián)系Yeasen索?。?/span>

     

    注意事項

     

    1、DNA模板的種類:推薦使用含T7啟動子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。

    2、轉錄模板的純度會顯著影響體外轉錄反應。在質(zhì)粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會顯著影響轉錄RNA的質(zhì)量。通過酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板;PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。

    3、20 μL反應體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無機焦磷酸酶可顯著提高轉錄產(chǎn)量。

    4為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    HB211021

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