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    UCF.ME<sup>?</sup>UltraNuclease GMP-grade全能核酸酶(同Benzonase)

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    詳細介紹

    UltraNuclease全能核酸酶,又稱非限制性核酸內(nèi)切酶、廣譜核酸酶;是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶,可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進行切割,將核酸完全消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸,能夠在非常廣泛的條件下(6 M Urea,0.1 M Guanidine HCl0.4% Triton X-100,0.1% SDS1 mM EDTA,1 mM PMSF)降解各種形式的(雙鏈,單鏈,線狀,環(huán)狀,天然或變性)DNARNA,廣泛用于去除生物制品中的核酸。

    本品經(jīng)基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表達純化并在GMP環(huán)境下制備,不僅可在科學研究中降低細胞上清和細胞裂解液粘度,提高蛋白純化效率及功能研究;還可以應用在病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)作為宿主殘留核酸去除試劑,將宿主殘留核酸至皮克(pg)級別從而提高生物制品功效和安全性;并且可以有效防止細胞治療和疫苗研究中人外周血單核細胞(PBMC)的結(jié)團。

    本品以無菌液體酶的形式提供,儲存于緩沖液(20 mM Tris-HCl pH 8.0,2 mM MgCl2,20 mM NaCl50%甘油)中,無色透明液體。

     

    產(chǎn)品性質(zhì)

    來源

    E. coli

    分子量(Molecular Weight

    26.5 kDa

    等電點

    6.85

    純度(Purity

    99%SDS-PAGE

    酶活(Enzyme Activity

    250-300 U/μL

    比活(Specific Activity

    1.5×106 U/mg蛋白

    最適pHOptimum pH

    8.0(工作范圍pH 6-10

    最適溫度(Optimum Temperature

    37℃(工作范圍0-42℃

    輔助因子(Cofactor

    1-10 mM Mg2+

    蛋白酶活性Protease

    陰性

    無菌檢查(Sterility

    陰性

    內(nèi)毒素(Endotoxin

    < 0.25 EU/1000 U

    宿主蛋白殘留(Host protein

    < 10 ppmμg/mL

    儲存緩沖液(Storage Buffer

    20 mM Tris-HCl pH 8.0,2 mM MgCl2,20 mM NaCl50%甘油

    活性單位定義(Unit Definition

    37℃,pH 8.0反應條件,2.625 mL反應體系中,在30 min內(nèi)使A260吸收值變化1.0(相當于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸)所用的酶量定義為一個活性單位(U)。

     

    運輸和保存方法

    干冰運輸。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。若是打開包裝后并4℃放置超過一周,建議過濾除菌防止微生物污染。

     

    注意事項

    為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

     

    推薦使用條件

    條件參數(shù)

    最佳條件

    有效條件

    Mg2+

    1-5 mM

    1-10 mM

    pH

    8-9

    6-10

    溫度

    37℃

    0-42℃

    DTT

    0-100 mM

    >0 mM

    巰基乙醇

    0-100 mM

    >0 mM

    單價陽離子

    0-20 mM

    0-150 mM

    磷酸根離子

    0-10 mM

    0-100 mM

    在最佳條件下推薦使用量及處理時間(372mM Mg2+,pH 8.0

    UltraNuclease用量(終濃度)

    處理時間

    0.25 U/mL

    > 10 h

    2.5 U/mL

    > 4 h

    25 U/mL

    30 min

     

    使用方法

    1、 樣本準備

    貼壁細胞:去除培養(yǎng)基,用PBS細胞,去除上清。

    懸浮細胞:離心收集細胞,用PBS清洗細胞,6,000 rpm 離心10 min,收集沉淀。

    大腸桿菌:離心收集菌體,用PBS清洗1次,8,000 rpm 離心5 min,收集沉淀。

    2、樣品處理

       將收集到的細胞沉淀按照質(zhì)量(g)與體積(mL)比1(10~20) 的比例進行裂解處理,也可通過在冰上或室溫通過機械或化學方法裂解細胞(1 g細胞約為109個)。

    3、酶的添加

    1)添加適量MgCl2將反應體系中的Mg2+ 濃度調(diào)整在1-5 mM范圍內(nèi),將pH調(diào)整成8-9。

    2按照250 Units消化1 g細胞沉淀的比例添加UltraNuclease,37孵育30min以上。也可以跟據(jù)上表中的推薦使用量自行選定添加方案,在一定范圍內(nèi)增加酶量,消化所需時間相應減少。

    】全能核酸酶的酶活受離子濃度、反應溫度及pH等因素的影響,初次使用時建議摸索最適濃度。

    4、上清獲取

    12,000 rpm的轉(zhuǎn)速離心30min獲得細胞裂解液上清,進行后續(xù)相關(guān)實驗。

    若溶液為高鹽溶液,偏酸性或者偏堿性,含有較高濃度的去垢劑、變性劑,應適當增加酶的用量或延長孵育時間。

    HB220729

     

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