SP Agarose HP(SP強(qiáng)陽離子交換層析填料HP)

離子交換樹脂主要包括強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂、強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂和弱堿性陰離子交換樹脂4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。

本品SP強(qiáng)陰離子交換樹脂以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為介質(zhì)，小顆粒設(shè)計(jì)，高分辨率，多應(yīng)用樣品的精細(xì)純化。本品帶電基團(tuán)-SO₃^–。

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產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。2-8℃保存，有效期5年。

使用方法

1 緩沖液的準(zhǔn)備

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。下表為常用的陽離子交換緩沖液。

表1：陽離子交換緩沖液

2 樣品準(zhǔn)備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

3 樣品純化

1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

2）將樣品加到平衡好的SP Agarose HP中（保證目的蛋白與填料充分接觸，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。

4 填料清洗

離子交換樹脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer 進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或pH值穩(wěn)定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

離子交換樹脂可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進(jìn)行清洗。

1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)

用2倍柱體積的1M NaOH 溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)

用3-4倍柱體積的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。

注意事項(xiàng)

1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

4）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

附表 問題及解決方案

HB220629