SP Agarose 6FF(SP強陽離子交換層析填料6FF)

 

離子交換樹脂主要包括強酸性陽離子交換樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂、強堿性陰離子交換樹脂和弱堿性陰離子交換樹脂4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。

本品SP強陰離子交換樹脂以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為介質(zhì)，可耐受較高的流速及更高的化學(xué)穩(wěn)定性，適合實驗室及工業(yè)大規(guī)模純化。本品帶電基團-SO₃^–。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)（Matrix）	高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球
粒徑（Bead size）	45-165 µm
離子交換類型（Type）	強陽離子
載量（Capacity）	0.18-0.25mmol H+/mL 介質(zhì)
流速（Flow Rate）	300-700 cm/h
pH范圍（pH Range）	4-13（長期）/ 3-14（短期）
儲存緩沖液（Buffer）	20%乙醇，0.2M NaAc

 

運輸和保存方法

冰袋運輸。2-8℃保存，有效期5年。

 

使用方法

1 緩沖液的準(zhǔn)備

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。

2 樣品準(zhǔn)備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

3 裝柱（使用儲液器裝填）

1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。

2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。

3）如果使用儲液器，應(yīng)立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產(chǎn)生氣泡。

4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設(shè)定的流速下進行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，也可以避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用你所使用泵的最大流速， 這樣也可以得到一個很好的裝填效果（【注】在隨后的色譜程序中，不要超過最大裝柱流速的75%）。當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。

5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。

6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。

7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。

8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。

4 樣品純化

1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。

2）將樣品加到平衡好的SP Agarose 6FF中（保證目的蛋白與填料充分接觸，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。

5  SDS-PAGE 檢測

將得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測純化效果。

6 填料清洗

離子交換樹脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高離子強度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer 進行平衡至離子強度或pH值穩(wěn)定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

離子交換樹脂可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進行清洗。

1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)

用2倍柱體積的1M NaOH 溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)

用3-4倍柱體積的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。

 

注意事項

1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

附表 問題及解決方案

問題	可能原因	推薦解決方案
柱子反壓過高	填料被堵塞	按照【填料清洗】部分對樹脂進行清洗。
		樣品中含有微小的固體顆粒，建議使用前用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。
洗脫樣品較雜	樹脂重復(fù)多次使用	按照【填料清洗】部分對樹脂進行清洗或更換新樹脂。
	平衡不充分	增加平衡液體積，確保樹脂充分平衡/洗雜。

HB220629