RIPA Lysis Buffer(strong, No inhibitors) RIPA裂解液(強(qiáng)，無抑制劑）

產(chǎn)品簡介

RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，對動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度不同，大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。

本品為裂解強(qiáng)度相對較強(qiáng)的RIPA裂解液（強(qiáng)，無抑制劑），不含蛋白酶抑制劑和磷酸酯酶抑制劑，使用本裂解液時(shí)，用戶可以根據(jù)具體用途自行添加特定抑制劑或者不添加抑制劑。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品信息

儲存條件

-25~-15℃保存，有效期1年。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。

使用說明

(一) 細(xì)胞樣品

1. 融解RIPA裂解液（強(qiáng)，無抑制劑），混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM?；蚋鶕?jù)實(shí)驗(yàn)需要加入總體效果更佳的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20123ES/20124ES）, 如檢測磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑混合物（Cat#20109ES）。

2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。細(xì)胞充分裂解后應(yīng)無沒有明顯的細(xì)胞沉淀。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×10⁵-1×10⁶個(gè)細(xì)胞/管，然后再裂解。因?yàn)榇髨F(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。

（二）組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液（強(qiáng)，無抑制劑），混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM，或根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入總體效果更佳的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20123ES/20124ES）, 如檢測磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑混合物（Cat#20109ES）。

3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

【注】RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53 等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

注意事項(xiàng)

1. 需自備PMSF或總體效果更佳的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20123ES/20124ES）、根據(jù)不同樣本專用的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20134ES-20138ES）, 如檢測磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑混合物（Cat#20109ES）。
2. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
3. 用RIPA裂解液（強(qiáng)，無抑制劑）裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（Cat#20201ES/20200ES）。 由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240321