如何分辨“真“、”假”全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀？

貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)（中國(guó)）有限公司 2023-08-18 11:00:43 142  瀏覽

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  上一篇《給大家推薦一種細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能檢測(cè)的方法》中，我們發(fā)現(xiàn)全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞樣品的重復(fù)性和梯度稀釋的結(jié)果準(zhǔn)確性上，都比半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)。

  
  

  那么大家可能會(huì)問(wèn)：

  “導(dǎo)致這樣的性能差異原因是什么呢？另外，目前市場(chǎng)上都自詡所賣的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是全自動(dòng)的，那我們?nèi)绾螀^(qū)分哪個(gè)是‘真’，哪個(gè)又是‘假’的呢？”

  
  

  要回答這2個(gè)問(wèn)題，首先我們需要對(duì)圖像法細(xì)胞計(jì)數(shù)的過(guò)程做下回顧。下面是圖像法臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析的基本流程。

  
  

  01

  細(xì)胞吹打混懸后定量吸取樣品

  02

  等體積吸取臺(tái)盼藍(lán)吹打染色

  03

  染色好的細(xì)胞加到血球計(jì)數(shù)板或細(xì)胞計(jì)數(shù)板上

  04

  顯微鏡下手動(dòng)或自動(dòng)統(tǒng)計(jì)死活細(xì)胞數(shù)，然后計(jì)算活細(xì)胞密度和活率

  05

  清洗血球計(jì)數(shù)板或更換新的細(xì)胞計(jì)數(shù)板

  
  

  傳統(tǒng)顯微鏡下手工細(xì)胞計(jì)數(shù)，以上5步操作都要操作人員來(lái)完成。這種方法因?yàn)槿藶椴僮鲙?lái)的誤差，導(dǎo)致結(jié)果差異有時(shí)會(huì)很大，甚至超出通?？梢越邮艿摹?0%偏差范圍。并且隨著樣品數(shù)越多，操作人員會(huì)逐漸造成眼疲勞，無(wú)法繼續(xù)進(jìn)行有效并準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)。

  
  

  手工顯微鏡法細(xì)胞計(jì)數(shù)的照片和計(jì)算方法

  
  

  插板式半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的出現(xiàn)，省去了操作人員肉眼統(tǒng)計(jì)和分析死活細(xì)胞數(shù)的步驟，儀器操作只需要將樣品混勻、定量染色和上樣分析（有時(shí)要手動(dòng)對(duì)焦），測(cè)試結(jié)束后更換新的細(xì)胞計(jì)數(shù)板做下一個(gè)樣品。

  
  

  用于半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的各類細(xì)胞計(jì)數(shù)板移液槍加樣的照片

  
  

  半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的缺點(diǎn)在于：由于每塊細(xì)胞計(jì)數(shù)板的檢測(cè)樣品數(shù)量有限，所以檢測(cè)新的樣品需要更換新的板子。但板子批次間存在差異，樣品和臺(tái)盼藍(lán)體積需要手動(dòng)定量，取樣量少代表性差（從30-50mL樣品中一般就只吸取20uL樣品），染色后的細(xì)胞樣品通過(guò)移液槍加樣有時(shí)還產(chǎn)生氣泡而報(bào)廢，用后廢棄的細(xì)胞計(jì)數(shù)板會(huì)產(chǎn)生二次污染物，這些目前都還沒有好的處理方法。

  
  

  那有沒可能細(xì)胞的混勻和染色，以及細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分析過(guò)程全部實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，同時(shí)不用手動(dòng)更換新的細(xì)胞計(jì)數(shù)板而自動(dòng)做下一個(gè)樣品呢？答案是使用全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀。

  
  

  全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀相比半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的優(yōu)勢(shì)點(diǎn)小結(jié)：

  01

  全自動(dòng)吹打混懸和臺(tái)盼藍(lán)染色

  全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的一個(gè)顯著特點(diǎn)是：能夠自動(dòng)完成細(xì)胞的吹打混懸和臺(tái)盼藍(lán)染色。

  
  

  
  

  要實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)吸取等體積的細(xì)胞樣品和臺(tái)盼藍(lán)染料，首先需要由儀器內(nèi)部的步進(jìn)馬達(dá)精確地完成加樣體積的控制。其次，因?yàn)榭梢匀詣?dòng)吸取樣品，所以全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀會(huì)有1個(gè)轉(zhuǎn)盤或孔板放置其他待測(cè)樣品。對(duì)于排在后面的細(xì)胞若發(fā)生沉降，就需要在測(cè)試前對(duì)樣品進(jìn)行吹打混懸，以防止細(xì)胞沉降導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果出現(xiàn)偏差。而這2步操作，半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都只能通過(guò)手動(dòng)來(lái)完成，從而引入人為操作誤差。

  
  

  同時(shí)，Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀單個(gè)樣品檢測(cè)的取樣體積200±20uL，加樣體積不需要很準(zhǔn)確，儀器自動(dòng)會(huì)完成定量取樣。相比半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀只有10-50uL的取樣體積，而且由手動(dòng)操作完成。取樣體積大代表性更好，測(cè)試結(jié)果更容易接近真實(shí)值。

  
  

  02

  動(dòng)態(tài)百圖分析

  Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)試細(xì)胞樣品，單個(gè)樣品拍攝的照片達(dá)到了100張，分析的細(xì)胞數(shù)量更多，1x10e6個(gè)/mL的細(xì)胞懸液拍攝100張照片的細(xì)胞數(shù)差不多2600個(gè)。單個(gè)樣品檢測(cè)拍攝的細(xì)胞數(shù)越多，檢測(cè)結(jié)果的系統(tǒng)誤差越小，測(cè)試結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性也相應(yīng)更高。

  
  

  其中1張照片（上左圖）和100張照片的分析柱狀圖

  
  

  03

  高通量和不間斷檢測(cè)

  全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的另一個(gè)特點(diǎn)是高通量和不間斷檢測(cè)，即待測(cè)樣品可以先放到轉(zhuǎn)盤或96孔板上，根據(jù)軟件中設(shè)置好的分析條件，儀器會(huì)自動(dòng)按要求完成細(xì)胞的計(jì)數(shù)和活率分析。

  
  

  Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀一次最多可以放21個(gè)樣品（使用24位轉(zhuǎn)盤）或96個(gè)樣品（使用96孔板）進(jìn)行分析測(cè)試。若使用24位轉(zhuǎn)盤，在檢測(cè)過(guò)程中還可以實(shí)現(xiàn)不間斷上樣測(cè)試，即樣品測(cè)試過(guò)程中，還可以放入新的待測(cè)樣品。

  
  

  
  

  綜上所述，全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在細(xì)胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來(lái)的誤差，同時(shí)百圖分析拍攝的細(xì)胞數(shù)多，結(jié)果代表性更好。所以，在細(xì)胞計(jì)數(shù)方面重復(fù)性和準(zhǔn)確性上相比半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)。

  
  

  同時(shí)，全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的高通量和不間斷檢測(cè)功能，又滿足實(shí)驗(yàn)室樣品量大，不同老師共用該儀器的檢測(cè)需求。并且每個(gè)樣品測(cè)試結(jié)束后，儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行管路清洗，儀器本身還帶有自動(dòng)過(guò)夜清洗功能，使得儀器一直處于待機(jī)狀態(tài)。所以，在操作便捷性上，全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀也勝過(guò)半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。

  
  

  以上這些特點(diǎn)可以用于區(qū)分我們使用的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是“全自動(dòng)”還是“半自動(dòng)”，同時(shí)也是為何全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能上要優(yōu)于半自動(dòng)的地方。希望大家可以通過(guò)這些方法來(lái)分辨“真”、“假”全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。