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    2025-01-10 10:50:14納米抗體序列設(shè)計(jì)
    納米抗體序列設(shè)計(jì)是一種生物技術(shù)手段,旨在通過(guò)計(jì)算機(jī)算法和生物信息學(xué)方法,優(yōu)化和設(shè)計(jì)出具有特定功能和性質(zhì)的納米抗體序列。這些納米抗體具有較小的分子量、高穩(wěn)定性和特異性,能夠與目標(biāo)分子高效結(jié)合。納米抗體序列設(shè)計(jì)在生物醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)、疾病診斷和治療等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用,為生物醫(yī)學(xué)研究和應(yīng)用提供了有力的工具。

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    2024-01-18 16:06:57EGFP蛋白全稱、大小、序列分析
    一、EGFP蛋白全稱 EGFP,全稱為增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein),是一種在生物科學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的熒光報(bào)告蛋白。它是由普通綠色熒光蛋白(GFP)進(jìn)行突變和優(yōu)化得到的,相較于原始的GFP,EGFP具有更高的熒光亮度和更穩(wěn)定的性質(zhì)。 二、EGFP蛋白大小 EGFP蛋白的大小為238個(gè)氨基酸,分子量約為27kDa。這個(gè)分子量相對(duì)較小,使其在融合蛋白、抗體標(biāo)記等生物分子標(biāo)記領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí),EGFP的相對(duì)分子量較小也意味著它對(duì)其他蛋白質(zhì)的負(fù)擔(dān)較小,這有助于保持標(biāo)記蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)和功能。 三、EGFP蛋白序列 以下是EGFP蛋白的氨基酸序列: MVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMEEEEDVMKDVEEETPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDP 通過(guò)分析EGFP的氨基酸序列,我們可以發(fā)現(xiàn)其中包含一些重要的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)。例如,在EGFP的氨基端,有一個(gè)由數(shù)個(gè)甘氨酸和絲氨酸組成的“環(huán)狀結(jié)構(gòu)”,這個(gè)結(jié)構(gòu)對(duì)于熒光發(fā)射起著關(guān)鍵作用。在羧基端,我們還可以看到一個(gè)“多肽區(qū)”,這個(gè)區(qū)域?qū)τ跓晒饬炼群头€(wěn)定性也有重要影響。此外,在EGFP的氨基酸序列中還包含多個(gè)突變位點(diǎn),這些位點(diǎn)使得EGFP相較于原始的GFP具有更高的熒光亮度和更穩(wěn)定的性質(zhì)。 四、總結(jié) EGFP是一種重要的熒光報(bào)告蛋白,通過(guò)對(duì)其全稱、大小和序列的深入了解,我們可以更好地理解其性質(zhì)和應(yīng)用。在實(shí)際的生物科學(xué)研究中,EGFP已被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域,為科研工作者提供了強(qiáng)有力的工具,有助于推動(dòng)生命科學(xué)研究的進(jìn)步。 更多蛋白標(biāo)簽詳情可以查看義翹神州網(wǎng):https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag 義翹神州:蛋白與抗體的專業(yè)引領(lǐng)者,歡迎通過(guò)百度搜索“義翹神州”與我們?nèi)〉寐?lián)系。 
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    2023-12-25 17:14:18重組抗體的類型有哪些?
    重組抗體,也被稱為重組免疫球蛋白,是通過(guò)基因工程技術(shù)將抗體的基因在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)并生產(chǎn)出來(lái)的一類抗體。與傳統(tǒng)的多克隆抗體和單克隆抗體相比,重組抗體具有更高的特異性和親和力,并且可以針對(duì)特定的抗原表位進(jìn)行設(shè)計(jì)和優(yōu)化。重組抗體的類型包括嵌合抗體、雙特異性抗體、抗體片段和Fc融合蛋白等。下面一起來(lái)看一下他們各種的應(yīng)用:https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview①嵌合抗體1975年,雜交瘤技術(shù)的發(fā)現(xiàn)徹底改變了抗體研究和臨床開發(fā)。然而,鼠源性抗體的療-效受到人抗鼠抗體(HAMA)效應(yīng)的限制,鼠源性單抗對(duì)人體具有異種蛋白的免疫原性 ,在人體內(nèi)半衰期較短。1984年,研究人員通過(guò)基因工程構(gòu)建了第一個(gè)嵌合抗體,也是公認(rèn)的第一種重組抗體,以降低鼠源抗體在人體內(nèi)的免疫原性。其中,約30%-35%的分子來(lái)源于小鼠的抗體序列,約65%-70%來(lái)源于人的抗體序列。所得嵌合抗體保留了親代小鼠抗體的抗原結(jié)合能力。抗體嵌合是開發(fā)治-療性人源化抗體的第一步。義翹神州采用CDR移植技術(shù)和計(jì)算機(jī)輔助分子建模,提供高質(zhì)量的單克隆抗體人源化服務(wù),成功率高,人源化程度>90%。②抗體片段每一個(gè)完整的免疫球蛋白(IgG)分子包含通過(guò)二硫鍵連接的兩條重鏈和兩條輕鏈??贵w片段(如Fab、scFv和VHH)體積小,比其全長(zhǎng)抗體具有更好的組織或腫瘤穿透力。因此,它們?cè)诿庖咧?療方面具有巨大的前景,尤其是在實(shí)體瘤方面。此外,它們的半衰期也較短,可用作放射性顯像劑。然而,由于缺乏Fc區(qū),它們不能引起Fc介導(dǎo)的抗體效應(yīng)功能,如抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。起初采用酶解法對(duì)IgG抗體進(jìn)行片段化。胃蛋白酶作用于鉸鏈區(qū)二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C端,水解產(chǎn)生被稱為F(ab’)2的二價(jià)Fab片段。然后,通過(guò)木瓜蛋白酶將該片段裂解為兩個(gè)相同的Fab片段。然而,酶解法限制了可制備的抗體片段類型,而且不適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)和純化。隨著抗體工程技術(shù)的進(jìn)步,這些問題可以通過(guò)重組生產(chǎn)抗體片段來(lái)解決??贵w基因克隆測(cè)序成功后,可通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染在原核表達(dá)系統(tǒng)(如大腸桿菌)和哺乳動(dòng)物系統(tǒng)(HEK293細(xì)胞)中表達(dá)抗體片段。憑借豐富的重組生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),義翹神州建立了高通量VHH表達(dá)平臺(tái),交付了多個(gè)VHH抗體生產(chǎn)項(xiàng)目,總體成功率超過(guò)90%。除了常見的VHH形式,我們還可以表達(dá)雙特異和多特異VHH。此外,義翹神州還可以表達(dá)其他各種高特異性和親和力的抗體片段,如scFv和Fab。③雙特異性抗體與常規(guī)單克隆抗體不同,雙特異性抗體(bsAb)具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn),可識(shí)別同一抗原上兩個(gè)不同抗原或表位。由于這一特性,雙特異性抗體備受研究者和制藥業(yè)的關(guān)注。截止目前,美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)已批準(zhǔn)了4種雙抗藥物,而且160多種雙抗正在進(jìn)行臨床試驗(yàn),用于治-療癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病和其他疾病。起初,雙特異性抗體通過(guò)四源雜交瘤技術(shù)制備,但這對(duì)下游抗體生產(chǎn)和純化構(gòu)成了巨大的挑戰(zhàn)。隨著過(guò)去20年重組DNA技術(shù)的發(fā)展,出現(xiàn)了幾種雙特異性抗體形式,以適應(yīng)所需的靶標(biāo)-產(chǎn)品特征。為了解決重鏈錯(cuò)配問題,Genentech首先提出了“knob-into-hole”(KiH)技術(shù),該技術(shù)通過(guò)對(duì)CH3結(jié)構(gòu)域進(jìn)行改造,在每條重鏈中創(chuàng)建一個(gè)“knob”或一個(gè)“hole”,以誘導(dǎo)異源二聚化。同樣地,研究人員也采用了common light chain 和CrossMab等其他技術(shù)來(lái)解決輕鏈錯(cuò)配問題。表達(dá)雙特異性抗體主要在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行。由于單克隆抗體和雙特異性抗體之間的各種結(jié)構(gòu)相似性,許多已建立的常規(guī)單抗純化工藝也可適用于雙特異性抗體。(參見另一篇文章:“雙特異性抗體:抗體治-療中的新星”)④Fc融合蛋白Fc融合蛋白(又稱Fc嵌合融合蛋白、Fc-Ig和Fc標(biāo)簽蛋白)是一種同源二聚體,由免疫球蛋白的Fc段與具有生物學(xué)活性的蛋白分子組成。雖然單克隆抗體是治-療性生物制劑開發(fā)的重-點(diǎn),但Fc融合蛋白也是一類成功的生物制藥產(chǎn)品,至少有13種藥物獲得了歐洲藥品管理局(EMA)和美國(guó)FDA的批準(zhǔn)。除治-療應(yīng)用外,F(xiàn)c融合蛋白還是基礎(chǔ)研究中的檢測(cè)試劑,包括流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué)和蛋白結(jié)合試驗(yàn)。事實(shí)上,與Fc區(qū)的連接可以提高一些結(jié)合蛋白的溶解度和穩(wěn)定性。鑒于其大小和對(duì)糖基化的需求(大多數(shù)是糖蛋白),F(xiàn)c融合蛋白主要在哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。目前,抗體工程技術(shù)取得了一定的進(jìn)步,這極大地促進(jìn)了各種形式重組抗體的開發(fā),用于疾病治-療。FDA已批準(zhǔn)了100多種抗體藥物,目前有多種抗體處于臨床后期開發(fā)階段。此外,重組抗體還可用于許多研究應(yīng)用:蛋白免疫印跡(WB)、免疫組織化學(xué)(IHC)、免疫熒光(IF)、流式細(xì)胞術(shù)(FC)和表面等離子體共振(SPR)??傊?,重組抗體是基因工程技術(shù)的重要應(yīng)用之一,其類型多樣,具有廣泛的應(yīng)用前景。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,重組抗體的生產(chǎn)成本和安全性問題也將得到進(jìn)一步優(yōu)化,為臨床治-療和科學(xué)研究提供更多有效的工具。同時(shí),我們也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到重組抗體的潛在風(fēng)險(xiǎn)和挑戰(zhàn),加強(qiáng)對(duì)其安全性和有效性的評(píng)估和監(jiān)管,以確保其能夠更好地服務(wù)于人類的健康事業(yè)。更多重組抗體詳情關(guān)注:https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats
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    2022-07-22 15:19:39脈沖磁共振序列成像
    脈沖磁共振序列成像脈沖磁共振成像實(shí)驗(yàn)儀利用物理學(xué)方法將抽象的理論運(yùn)用多媒體進(jìn)行展示,使人們能夠直觀地了解到其成像效果,進(jìn)而可以使我們迅速了解磁共振的成像原理。脈沖磁共振序列成像原理脈沖磁共振成像實(shí)驗(yàn)儀由多個(gè)部分組成,主要包括了磁鐵、探頭、開關(guān)放大器以及相位檢波器等。探頭內(nèi)部主要包括了梯度線圈與射頻線圈,其中,探頭內(nèi)部的梯度線圈能夠?qū)崿F(xiàn)空間相位編碼和頻率編碼,而探頭內(nèi)部的射頻線圈主要是將樣品放入到射頻線圈中,這樣一方面能夠達(dá)到旋轉(zhuǎn)磁場(chǎng)的目的,另一方面還能夠觀察自由旋進(jìn)信號(hào)的發(fā)射線圈和接收線圈。在觀察自由旋進(jìn)信號(hào)的時(shí)候,可以采用開關(guān)放大器將探頭內(nèi)的射頻線圈與相位檢波器進(jìn)行連接,接下來(lái),可以利用振蕩器與射頻脈沖發(fā)生器,從而獲得相應(yīng)的相位檢波器與射頻脈沖的射頻基準(zhǔn)。但是如果在采集上存在困難,那么可以利用相位檢波器獲得比較容易采集的低頻信號(hào)。蕞終可以得到脈沖核磁共振成像所需要的相位精度。脈沖核磁共振成像實(shí)驗(yàn)儀的磁體主要是采用微米精度加工技術(shù)而實(shí)現(xiàn)的,因此,通常情況下它的磁場(chǎng)均勻度相對(duì)比較高。同時(shí),脈沖核磁共振成像實(shí)驗(yàn)儀利用恒溫控制器對(duì)磁鐵進(jìn)行控制,因此,其穩(wěn)定性比較高。此外,在DDS技術(shù)的支持下,射頻電路的工作頻率不僅具有較高的穩(wěn)定度,同時(shí)還能夠進(jìn)行較大范圍且高分辨率調(diào)節(jié)。脈沖核磁共振的整個(gè)過(guò)程中,如果進(jìn)行加載脈沖的操作,那么實(shí)際上就是脈沖的受激吸收過(guò)程。與此同時(shí),可以發(fā)現(xiàn),脈沖自由衰減的時(shí)候?qū)儆谧园l(fā)式輻射,同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)受激輻射的現(xiàn)象。脈沖磁共振成像技術(shù)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)以及物理學(xué)中,脈沖核磁共振實(shí)驗(yàn)儀不僅使人們了解到共振現(xiàn)象及各種脈沖序列的相關(guān)原理,同時(shí)也使人們充分認(rèn)識(shí)到磁共振成像、成像原理及圖像重建的數(shù)學(xué)處理方法。從而使人們對(duì)磁共振成像技術(shù)有一個(gè)更深入的認(rèn)識(shí)。
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    2024-10-24 15:19:27氨基酸分析儀新建序列如何操作?檢測(cè)結(jié)果怎么處理?
    氨基酸分析儀新建序列修改氨基酸分析儀是一種重要的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,用于檢測(cè)和分析樣品中的氨基酸組成。隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展,分析儀的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大,操作功能也越來(lái)越強(qiáng)大。在使用氨基酸分析儀時(shí),研究人員有時(shí)需要對(duì)其預(yù)設(shè)的檢測(cè)序列進(jìn)行新建或修改,以滿足具體實(shí)驗(yàn)需求。為什么需要新建或修改序列?氨基酸分析儀通常配有預(yù)設(shè)的序列,能夠滿足大多數(shù)常規(guī)樣品的分析需求。某些特定的實(shí)驗(yàn)或復(fù)雜樣品可能需要不同的檢測(cè)時(shí)間、流速、洗脫劑等參數(shù)調(diào)整,預(yù)設(shè)的序列并不能完全滿足這些需求。此時(shí),研究人員需要新建或修改分析序列,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。例如,當(dāng)分析特殊的蛋白質(zhì)片段、天然產(chǎn)物或其他復(fù)雜樣本時(shí),氨基酸的分離和檢測(cè)需要更為細(xì)致的控制。而通過(guò)新建或修改序列,用戶可以根據(jù)樣本的特性,設(shè)置的檢測(cè)條件,避免數(shù)據(jù)的偏差或不準(zhǔn)確。如何進(jìn)行新建序列的步驟1. 參數(shù)設(shè)置新建序列的步是根據(jù)樣本特性設(shè)定關(guān)鍵參數(shù)。這包括氨基酸的分離條件、洗脫劑的使用、柱溫以及流速等。通常情況下,不同的氨基酸需要不同的流速和梯度條件才能實(shí)現(xiàn)分離。2. 梯度程序的編寫在氨基酸分析中,梯度洗脫法通常用于提高分離效果。新建序列時(shí),用戶可以自定義梯度程序,通過(guò)設(shè)置洗脫劑的比例變化、流速的調(diào)整、時(shí)間段的劃分等,來(lái)實(shí)現(xiàn)不同氨基酸的有效分離。確保梯度程序的穩(wěn)定性和可控性,是獲得高質(zhì)量分析結(jié)果的關(guān)鍵。3. 檢測(cè)順序的安排新建序列時(shí),用戶可以根據(jù)分析需求調(diào)整檢測(cè)順序,以優(yōu)化時(shí)間和效率。合理的檢測(cè)順序不僅能減少樣品損耗,還能提高儀器的使用效率。例如,將容易分離的氨基酸安排在前,減少檢測(cè)時(shí)間;而對(duì)于難分離的氨基酸,可以適當(dāng)延長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間,提高分離度和檢測(cè)精度。修改序列時(shí)的注意事項(xiàng)1. 保持序列的邏輯一致性修改序列時(shí),必須確保所做的調(diào)整與整體分析流程相符。例如,在改變洗脫劑梯度時(shí),必須考慮到檢測(cè)順序的影響,避免氨基酸出現(xiàn)重疊或分離不完全的問題。2. 記錄和保存修改內(nèi)容在分析儀中進(jìn)行任何序列的修改后,務(wù)必將新的序列保存并詳細(xì)記錄,以便將來(lái)參考或重復(fù)實(shí)驗(yàn)。通常情況下,分析儀會(huì)提供多個(gè)保存通道,允許用戶保存不同的序列版本,這有助于避免數(shù)據(jù)丟失或重復(fù)操作。3. 定期校驗(yàn)和維護(hù)儀器修改序列后,建議進(jìn)行一次儀器校驗(yàn),確保新建或修改的序列在儀器上能夠正常運(yùn)行。儀器的狀態(tài)和維護(hù)情況也會(huì)直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此定期的維護(hù)和校準(zhǔn)十分必要。
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    2024-01-16 16:35:20免疫組化抗體(IHC)的實(shí)踐應(yīng)用與常見問題詳解
    免疫組化法(IHC)是使用抗體檢測(cè)組織切片(例如肝臟、胰-腺或心臟)中細(xì)胞蛋白質(zhì)(抗原)的過(guò)程。 當(dāng)組織樣本被送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行疾病檢查時(shí),有幾個(gè)細(xì)節(jié)不易確定。幾種疾病或疾病亞型在顯微鏡下可能看起來(lái)相似或看起來(lái)具有相似大小的細(xì)胞,但具有不同的行為和必要的治-療,區(qū)分它們的最佳方法是檢測(cè)這些細(xì)胞上作為標(biāo)記的特定分子。免疫組化法(IHC)是一種使用抗體(匹配分子)的技術(shù),用于尋找、識(shí)別附著在細(xì)胞上的標(biāo)記物。在顯微鏡下可以看到抗體本身,這有助于技術(shù)人員進(jìn)行精確識(shí)別。 免疫組化法(IHC)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)中,特別是癌癥診斷。淋巴瘤是依賴于IHC進(jìn)行正確診斷和治-療決策的癌癥之一。  免疫組化常見問題:?jiǎn)栴}一:我應(yīng)該使用PIER還是HIER進(jìn)行抗原修復(fù)? 固定過(guò)程可能會(huì)掩蓋抗原,導(dǎo)致抗體結(jié)合無(wú)法進(jìn)行。這種掩蓋可以通過(guò)一種稱為抗原修復(fù)/抗原去掩蔽的技術(shù)來(lái)逆轉(zhuǎn),該技術(shù)可以通過(guò)加熱(HIER;熱誘導(dǎo)抗原修復(fù))或蛋白酶(PIER;蛋白水解誘導(dǎo)抗原修復(fù))介導(dǎo)。后者使用蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。PIER方法通過(guò)降解掩蓋表位的肽而起作用。然而,PIER也可能導(dǎo)致樣品形態(tài)或抗原本身的改變。因此,PIER的使用頻率低于HIER,后者通過(guò)恢復(fù)表位的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)而起作用。為了確定是否應(yīng)該進(jìn)行抗原修復(fù)以及采用哪種方法,應(yīng)遵循以下指南:進(jìn)行文獻(xiàn)檢索,以確定其他研究人員如何可視化您感興趣的抗原。檢查抗體供應(yīng)商是否推薦了特定的抗原修復(fù)-方案。如果沒有特定的協(xié)議可用,我們建議使用HIER而不是PIER協(xié)議。對(duì)于HIER,總是使用中性抗原修復(fù)緩沖液,并與未進(jìn)行抗原修復(fù)的樣品進(jìn)行比較。如果中性染色溶液沒有產(chǎn)生良好的染色效果,則應(yīng)測(cè)試堿性或酸性抗原修復(fù)緩沖液。除了pH值外,其他需要優(yōu)化的參數(shù)是溫度和持續(xù)時(shí)間。理想情況下,嘗試各種pH值、溫度和時(shí)間組合。為了排除由HIER過(guò)程引起的偽影,始終包括一個(gè)控制樣品,該樣品在沒有HIER步驟的情況下進(jìn)行染色。  問題二:如何選擇IHC實(shí)驗(yàn)的抗體,單克隆抗體還是多克隆抗體? 單克隆抗體和多克隆抗體的抗體特性決定了其優(yōu)缺點(diǎn)。單克隆抗體是針對(duì)單個(gè)表位的同種免疫球蛋白??贵w是由一個(gè)動(dòng)物的單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的,因此在免疫化學(xué)上相似。多克隆抗體是針對(duì)同一抗原的各種表位的異質(zhì)抗體混合物??贵w是由動(dòng)物的不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的,因此在免疫化學(xué)上不同。多克隆混合物中的抗體可能具有略微不同的特異性和親和力。 如果蛋白質(zhì)靶標(biāo)具有相同的氨基酸序列,單克隆抗體更合適。一旦抗原因各種原因發(fā)生構(gòu)象變化,如蛋白質(zhì)相互作用、翻譯后修飾、溫度、pH值、固定、鹽濃度等,單克隆抗體和抗原的聯(lián)合作用將受到嚴(yán)重影響。由于多克隆抗體具有多個(gè)表位,不受蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的影響,一般來(lái)說(shuō),在一定范圍內(nèi)的pH和鹽濃度內(nèi),多克隆抗體之間的抗原結(jié)合比單克隆抗體更穩(wěn)定。 問題三:一抗的孵育時(shí)間多久?一抗的孵育時(shí)間與溫度,抗體濃度有關(guān)。一般情況下,在37℃的條件下,孵育1-2小時(shí)左右。在室溫的條件下,孵育3小時(shí)左右。在4℃的條件下,孵育18-24小時(shí)左右。 義翹神州提供石蠟切片免疫組化(IHC)檢測(cè)服務(wù),更多免疫組化的問題可以上義翹神州網(wǎng)咨詢!https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service
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