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2025-01-10 10:50:10免疫熒光顯微成像: 免疫熒光顯微成像是一種通過標(biāo)記特異性抗原或抗體，利用熒光顯微鏡觀察樣本中目標(biāo)分子分布和表達(dá)的技術(shù)。該技術(shù)主要原理是利用抗原-抗體反應(yīng)，將熒光染料標(biāo)記在目標(biāo)分子上，通過顯微鏡觀察熒光信號(hào)。免疫熒光顯微成像在生物醫(yī)學(xué)研究、疾病診斷等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用，是揭示生物分子相互作用、細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的重要手段。您是否有關(guān)于科學(xué)儀器的具體需求或問題？

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直播預(yù)告 | 免疫熒光顯微成像技術(shù)助力腫瘤微環(huán)境研究

6月28日，Cell Signaling Technology（CST）特邀徠卡顯微系統(tǒng)產(chǎn)品經(jīng)理童昕做客博士云講座，帶大家了解免疫熒光顯微成像技術(shù)如何助力腫瘤微環(huán)境研究。

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2023-07-02
免疫熒光顯微成像
直播預(yù)告 | 免疫熒光顯微成像技術(shù)助力腫瘤微環(huán)境研究

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2023-06-25

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免疫熒光顯微成像問答

2022-11-23 10:51:20免疫熒光顯微成像詳解（上）——免疫熒光原理、步驟: 前言免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)，它是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位，以及利用定量技術(shù)（比如流式細(xì)胞儀）測(cè)定含量。直接法將標(biāo)記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定的溫度和時(shí)間的染色，用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體，室溫下干燥后封片、鏡檢。間接法如檢查未知抗原，先用已知未標(biāo)記的特異抗體（第一抗體）與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，用水洗去未反應(yīng)的抗體，再用標(biāo)記的抗抗體（第二抗體）與抗原標(biāo)本反應(yīng)，使之形成抗體—抗原—抗體復(fù)合物，再用水洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗體，干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體，則表明抗原標(biāo)本是已知的，待檢血清為第一抗體，其它步驟的抗原檢查相同。標(biāo)記的抗抗體是抗球蛋白抗體，同于血清球蛋白有種的特異性，如免疫抗雞血清球蛋白只對(duì)雞的球蛋白發(fā)生反應(yīng)，因此，制備標(biāo)記抗體適用于任何抗原的診斷。一、實(shí)驗(yàn)步驟免疫熒光實(shí)驗(yàn)的主要步驟包括樣片制備、固定及通透（或稱為透化）、封閉、抗體孵育、封片及熒光檢測(cè)等。1、樣品準(zhǔn)備對(duì)于單層生長(zhǎng)細(xì)胞，在傳代培養(yǎng)時(shí)，將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過（70%乙醇中浸泡）的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層后取出蓋玻片即可，操作過程要小心，防止細(xì)胞脫片。對(duì)于懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，有兩種方式，一種是取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片，把細(xì)胞片浸入封閉液中固定，封閉后滴加一抗和二抗孵育；另一種是先在懸浮液中進(jìn)行固定和染色，離心洗脫后，用移液管移至盒式玻片進(jìn)行后續(xù)抗體孵育。對(duì)于冰凍切片制備，建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。組織一定要冷凍適度，切片時(shí)選用干凈鋒利的刀片，防止裂片和脫片。對(duì)于石蠟切片的制備，要先進(jìn)行脫蠟和抗原修復(fù)的處理。2、固定做好切片并風(fēng)干后立即用合適的固定液（固定液包括有機(jī)溶劑和交聯(lián)劑，其選擇取決于抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性）進(jìn)行固定，尤其要較長(zhǎng)時(shí)間保存的白片，一定要及時(shí)固定和適當(dāng)保存。固定時(shí)間則取決于固定組織切片的大小和類型，對(duì)大多數(shù)組織，18-24h即可，而細(xì)胞的固定時(shí)間較短。3、通透針對(duì)胞內(nèi)抗原，使用0.5% Triton X-100或丙酮等通透劑進(jìn)行通透，這一步的目的是使抗體進(jìn)入胞內(nèi)。4、封閉為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合，需要在一抗孵育前先用封閉液（一般包括與二抗同一來(lái)源的血清、BSA或者羊血清）封閉，減弱背景著色。封閉開始后，要注意樣品的保濕，避免樣品干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。5、一抗孵育一抗孵育溫度一般分為：4℃、室溫、37℃，其中4℃效果更佳；孵育時(shí)間與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37℃孵育1-2h，4℃過夜（從冰箱拿出后37℃復(fù)溫45min）。具體條件還要根據(jù)樣品、稀釋液等條件進(jìn)行摸索嘗試。6、熒光二抗孵育熒光二抗孵育一般在室溫或37℃孵育30min-1h，該過程必須在避光環(huán)境下進(jìn)行，防止熒光淬滅。熒光素標(biāo)記的二抗隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，可能會(huì)有大量的游離熒光素殘留，需要注意配制時(shí)采用小包裝并進(jìn)行適當(dāng)?shù)碾x心。7、復(fù)染一般采用DAPI進(jìn)行復(fù)染，目的是形成細(xì)胞輪廓，從而對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位。8、封片為了長(zhǎng)期保存，我們需要對(duì)樣本進(jìn)行封片，用吸水紙吸干爬片上的液體，一般用緩沖甘油等或?qū)ｉT的抗熒光淬滅的封片液。9、熒光觀察有條件的話立即用熒光顯微鏡觀察拍照，若不能及時(shí)拍照，也要做好封片和封固，保持避光和濕度。熒光顯微鏡的成像能力對(duì)最終的結(jié)果也會(huì)造成很大的影響，好的熒光顯微鏡能夠最大限度地收集熒光信號(hào)，并呈現(xiàn)高分辨率的圖片，使細(xì)節(jié)更清楚，更易得到一張效果極佳的結(jié)果圖。注意：切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當(dāng)?shù)丶訌?qiáng)清洗(延長(zhǎng)時(shí)間和增多次數(shù))尤為重要，一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均為5次*5min。(1)單獨(dú)沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染；(2)溫柔沖洗，防止切片的脫落?？墒褂媒捶绞剑?3)沖洗的時(shí)間要足夠，才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)；(4)PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求（建議PH在7.4-7.6，濃度是0.01M；中性及弱堿性條件有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解）。根據(jù)上述步驟完成免疫熒光實(shí)驗(yàn)后，就需要進(jìn)行熒光顯微成像，得到我們想要的結(jié)果。選擇一款操作簡(jiǎn)單、成像清晰、效果卓越的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察拍照，才能輕松得到更為理想的結(jié)果圖，達(dá)到事半功倍的效果。Echo Revolve正倒置一體熒光顯微鏡Echo Revolve正倒置一體熒光顯微鏡作為一款電動(dòng)化、智能化的顯微鏡，具有以下優(yōu)勢(shì)：? 正倒置一體快速切換：切片、細(xì)胞觀察隨心切換，無(wú)懼任何耗材；? DHR數(shù)字降噪功能：極大地降低了背景噪音和熒光干擾，提高圖像銳度，加深細(xì)節(jié)，得到分辨率更高的圖片；? 強(qiáng)大的Z-Stacking功能：通過高精度電動(dòng)化Z軸層掃來(lái)擴(kuò)大景深，解決厚樣本觀察問題，提高圖像分辨率；? 500MP單色相機(jī)：能夠采集更多熒光信號(hào)，助力低熒光強(qiáng)度樣本觀察；? 多通道熒光自動(dòng)拍攝疊加功能：可自動(dòng)進(jìn)行多通道成像的疊加，個(gè)性化選擇查看/保存各通道的組合圖像。

2022-09-21 10:47:13明美熒光顯微成像解決方案: （1）醫(yī)院真菌、婦科等常規(guī)熒光檢測(cè)推薦：MF52-N/MF31+普通顯微鏡相機(jī)MSX1/MC50-S/MS60/MD50等? 數(shù)顯LED熒光模塊，可定制的單色或三色激發(fā)，推拉式切換，即開即用? 高數(shù)值孔徑熒光物鏡，高清晰度與高熒光透過率? 可拍攝數(shù)字圖片，方便出具報(bào)告，可合成多色熒光圖像（2）高校、研究所等科研研究，醫(yī)院癌癥復(fù)核等高要求檢測(cè)推薦：MF53-N/MF43-N + MG100/MG120 + 高靈敏度相機(jī)MC50-S/MS23/MSH12? 研究級(jí)熒光顯微鏡機(jī)身，具備更好的熒光效果和更強(qiáng)的擴(kuò)展性能，應(yīng)對(duì)各種需求? 6孔轉(zhuǎn)盤式熒光附件，可按需自主選擇激發(fā)塊，實(shí)現(xiàn)對(duì)多種熒光染料觀測(cè)? 可定制雙通等特殊濾光片組，實(shí)現(xiàn)效率更高的FISH等觀察應(yīng)用需求? LED激發(fā)光源，大功率寬光譜激發(fā)效果好，即開即用使用便捷，壽命長(zhǎng)性價(jià)比高? 高靈敏度相機(jī)，效率更高得實(shí)時(shí)反饋動(dòng)態(tài)圖像，搭配軟件可實(shí)現(xiàn)FISH等應(yīng)用（4）四家品牌普通顯微鏡升級(jí)熒光觀察推薦：數(shù)顯熒光模塊，或批量定制熒光模塊? 可適配四、品牌大部分無(wú)限遠(yuǎn)光學(xué)顯微鏡，高性價(jià)比升級(jí)熒光觀察? 數(shù)顯屏幕，直觀顯示當(dāng)前波段和亮度，方便定量分析? 內(nèi)置LED熒光光源，可選單色或BGU等三色激發(fā)，可選電動(dòng)切換或四色激發(fā)（5）四家品牌熒光顯微鏡升級(jí)LED熒光光源或定制熒光激發(fā)塊推薦：寬光譜大功率熒光光源MG-120，四通道光源MG-120? 可匹配四家品牌主流熒光顯微鏡，覆蓋可見光激發(fā)光譜，激發(fā)效果穩(wěn)定? 觸屏控制器，直觀易用的操作體驗(yàn)，可加入人走燈滅等智能功能? 壽命長(zhǎng)，即開即用，1個(gè)LED光源頂50個(gè)汞燈，無(wú)需預(yù)熱? 光強(qiáng)調(diào)節(jié)高度線性，MG-120支持軟件觸發(fā)和TTL電平脈沖模式觸發(fā)來(lái)源：https://www.mshot.com/article/1527.html

2023-08-10 09:32:25倒置熒光顯微鏡下的免疫熒光細(xì)胞: 倒置熒光顯微鏡下的免疫熒光細(xì)胞：探索微觀世界的奧秘顯微鏡觀察免疫熒光細(xì)胞是一種重要的實(shí)驗(yàn)方法，用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸等成分的表達(dá)、功能和相互作用，目前，免疫熒光顯微鏡已經(jīng)成為生物學(xué)研究中不可或缺的工具之一。在倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)，需要選擇合適的顯微鏡參數(shù)，以確保觀察的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。例如，光源的種類、顯微鏡的分辨率、物鏡放大倍數(shù)和熒光通過率等因素。此外，在進(jìn)行免疫熒光顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)，需要選擇合適的熒光強(qiáng)度和熒光顏色，以避免對(duì)觀察結(jié)果的干擾。倒置熒光顯微鏡MF52-N采用無(wú)限遠(yuǎn)光學(xué)設(shè)計(jì)和數(shù)顯LED熒光模塊，光路經(jīng)過深度優(yōu)化，能提供簡(jiǎn)單易用的熒光激發(fā)和高質(zhì)量的相襯、熒光和明場(chǎng)成像，可選雙光路、一體供電、人走燈滅，廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥、醫(yī)療檢測(cè)等領(lǐng)域。免責(zé)聲明本站無(wú)法鑒別所上傳圖片、字體或文字內(nèi)容的版權(quán)，如無(wú)意中侵犯了哪個(gè)權(quán)利人的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，請(qǐng)來(lái)信或來(lái)電告之，本站將立即予以刪除，謝謝。來(lái)源：https://www.mshot.com/article/1810.html

2023-08-01 15:38:08免疫熒光細(xì)胞用什么顯微鏡觀察？: 倒置熒光顯微鏡下的免疫熒光細(xì)胞：探索微觀世界的奧秘顯微鏡觀察免疫熒光細(xì)胞是一種重要的實(shí)驗(yàn)方法，用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸等成分的表達(dá)、功能和相互作用，目前，免疫熒光顯微鏡已經(jīng)成為生物學(xué)研究中不可或缺的工具之一。在倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)，需要選擇合適的顯微鏡參數(shù)，以確保觀察的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。例如，光源的種類、顯微鏡的分辨率、物鏡放大倍數(shù)和熒光通過率等因素。此外，在進(jìn)行免疫熒光顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)，需要選擇合適的熒光強(qiáng)度和熒光顏色，以避免對(duì)觀察結(jié)果的干擾。倒置熒光顯微鏡MF52-N采用無(wú)限遠(yuǎn)光學(xué)設(shè)計(jì)和數(shù)顯LED熒光模塊，光路經(jīng)過深度優(yōu)化，能提供簡(jiǎn)單易用的熒光激發(fā)和高質(zhì)量的相襯、熒光和明場(chǎng)成像，可選雙光路、一體供電、人走燈滅，廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥、醫(yī)療檢測(cè)等領(lǐng)域。免責(zé)聲明本站無(wú)法鑒別所上傳圖片、字體或文字內(nèi)容的版權(quán)，如無(wú)意中侵犯了哪個(gè)權(quán)利人的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，請(qǐng)來(lái)信或來(lái)電告之，本站將立即予以刪除，謝謝。來(lái)源：https://www.mshot.com/article/1810.html

2022-12-15 16:35:43ibidi應(yīng)用指南|免疫熒光實(shí)驗(yàn): 　　免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理　　　　免疫熒光(IF)是使用顯微鏡深入了解細(xì)胞結(jié)構(gòu)和過程的有效方法。此方法可評(píng)估特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和位置，使得免疫熒光成為科學(xué)家解決許多細(xì)胞生物學(xué)問題不可或缺的工具?！　　　∶庖邿晒鈱?shí)驗(yàn)基于以下主要步驟：　　　　1.特異性抗體與感興趣的蛋白質(zhì)結(jié)合。　　　　2.熒光染料與這些免疫復(fù)合物偶聯(lián)，以便使用顯微鏡觀察感興趣的蛋白質(zhì)?！　　　　　?nèi)皮細(xì)胞中vWF的免疫熒光染色。肌動(dòng)蛋白用phalloidin染色(綠色)，細(xì)胞核用DAPI染色(藍(lán)色)。　　　　區(qū)分直接和間接免疫熒光。在直接免疫熒光中，一抗直接偶聯(lián)到熒光團(tuán)（也稱為熒光色素），便于處理和快速可視化。在間接免疫熒光中，使用特異性結(jié)合一抗的二級(jí)熒光團(tuán)偶聯(lián)抗體來(lái)可視化感興趣的結(jié)。　　　　盡管di二種方法比直接免疫熒光更耗時(shí)，但它有幾個(gè)顯著的優(yōu)勢(shì)，比如它通常更便宜，因?yàn)槎箍梢杂糜诓煌囊豢?。此外，通過結(jié)合多個(gè)一抗和特定的二抗(每個(gè)抗體都用不同的熒光團(tuán)標(biāo)記)，可以在單個(gè)樣品中平行特異地顯示多個(gè)蛋白質(zhì)(多色免疫熒光)?！　　　　　∶庖邿晒馊旧?典型的工作流程　　　　每個(gè)免疫熒光染色方案由培養(yǎng)、固定、染色、成像四個(gè)主要步驟組成，可細(xì)分如下:　　　　　　免疫熒光染色是一種非常敏感的方法，可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小變化可能會(huì)導(dǎo)致不同的結(jié)果，而這些結(jié)果不再具有可比性。因此，在您的特定方案中精確地保持完全相同的條件是非常重要的(例如，細(xì)胞密度、抗體稀釋度、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間)?！　　　　　∶庖邿晒鈱?shí)驗(yàn)方案對(duì)比　　　　傳統(tǒng)染色與ibidi方案染色　　　　當(dāng)使用任何ibidi解決方案時(shí)，ibidi的免疫熒光染色方案比傳統(tǒng)方案要簡(jiǎn)便快速的多。無(wú)需在松散的蓋玻片上生長(zhǎng)細(xì)胞，細(xì)胞可直接在ibidi玻片上生長(zhǎng)和染色。　　　　　　　　用于免疫熒光應(yīng)用的各種ibidi產(chǎn)品　　　　　　更多ibidi相關(guān)產(chǎn)品的免疫熒光實(shí)驗(yàn)應(yīng)用可查閱我們雷萌公眾號(hào)相關(guān)文章！　　　　參考文獻(xiàn)　　　　K.G. Zyner, A. Simeone, S.M. Flynn, et al. G-quadruplex DNA structures in human stem cells and differentiation. Nat Commun, 2022, 10.1038/s41467-021-27719-1　　　　C. Xu, et al. NPTX2 promotes colorectal cancer growth and liver metastasis by the activation of the canonical Wnt/beta-catenin pathway via FZD6. Cell Death & Disease, 2019, 10.1038/s41419-019-1467-7　　　　Kobayashi, T., et al. Principles of early human development and germ cell program from conserved model systems. Nature, 2017, 10.1038/nature22812　　　　H. Tada et al. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794　　　　Read article