寡核苷酸HPLC分析中色譜柱的選擇

寡核苷酸的SEC分析

SEC分離模式常用于分析因核堿基數(shù)、磷酸基不同導(dǎo)致的分子量差別，對寡核苷酸進(jìn)行簡單的質(zhì)量控制或純度研究。TSKgel UP-SW3000、G3000SWXL以及TSKgel G2000SWXL這三款SEC色譜柱都非常適合用來分析寡核苷酸。

天然型DNA核酸藥物Defitelio就是采用TSKgel G2000SWXL進(jìn)行質(zhì)量分析的。

分離實(shí)例：脂質(zhì)體包裹的siRNA的SEC分離

參考文獻(xiàn): Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb. 23 (2011) 125，Edited by J. V. Bonilla et al.

寡核苷酸的IEC分析

在IEC分離模式中，如果使用無孔填料的色譜柱可以提高分辨率。TSKgel DNA-NPR(粒徑2.5 μm)和TSKgel DNA-STAT(粒徑5 μm)都是采用無孔填料的色譜柱。

在常規(guī)HPLC系統(tǒng)上推薦優(yōu)先使用TSKgel DNA-STAT。該色譜柱填料粒徑為5 μm，操作壓力低，樣品載量大。在樣品吸附強(qiáng)的情況下，即使在高溫、高鹽濃度下(2～3 mol/L)進(jìn)行梯度分離，DNA-STAT的分離帶也更寬，分辨率更高。

分離實(shí)例: TSKgel DNA-NPR和DNA-STAT色譜柱對相同長度(20mer)的4種寡核苷酸的分離

分離實(shí)例: TSKgel DNA-NPR陰離子交換色譜柱分離合成的13mer寡核苷酸

核酸分析的ZD

分離核酸時需要根據(jù)樣品的穩(wěn)定性和大小來選擇或更換洗脫液。如果核酸的穩(wěn)定性很高，可以通過采用堿性溶液(NaOH，pH 12)和高溫(60℃)來提高分辨率。對于穩(wěn)定性差的樣品，則在中性(pH 7～8)，40°C條件下分離。

如果樣品是超巨大雙鏈DNA，如質(zhì)粒DNA，使用TSKgel DEAE-NPR (4.6 mm I.D.×3.5 cm)的話不僅可以獲得高分辨率，而且回收率也會更好。

標(biāo)簽：色譜柱