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Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒

品牌：翌圣生物
產(chǎn)地：
供應(yīng)商報(bào)價(jià)：面議

翌圣生物科技(上海)股份有限公司更新時(shí)間：2024-12-24 09:03:45

銷售范圍售全國

入駐年限第1年

營業(yè)執(zhí)照已審核

同類產(chǎn)品細(xì)胞檢測與分析(254件)

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詳細(xì)介紹

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒	40754ES60	100T

產(chǎn)品描述

細(xì)胞衰老（Cell senescence）是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制，一般含義是復(fù)制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細(xì)胞經(jīng)過有限次數(shù)的分裂后，停止分裂，此時(shí)細(xì)胞雖然是存活的，但是細(xì)胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細(xì)胞研究常用的生物學(xué)特征包括：1）不可逆的生長停滯；2）與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作為溶酶體內(nèi)的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性，但是衰老細(xì)胞內(nèi)其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性，且隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。

本試劑盒正是基于SA -β-gal活性變化的生物學(xué)特征而設(shè)計(jì)的，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下生成深藍(lán)色產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察顏色變化以分析細(xì)胞的衰老狀況。

本試劑盒可以培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。產(chǎn)品性能穩(wěn)定，參數(shù)經(jīng)優(yōu)化，著色敏感，特異性高。僅對衰老細(xì)胞進(jìn)行染色，不會染色衰老前的細(xì)胞（presenescent cells）、靜止期細(xì)胞（quiescent cells）、永生細(xì)胞（immortal cells）或腫瘤細(xì)胞。

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	規(guī)格
40754-A	β-半乳糖苷酶染色液A	1.5 mL
40754-B	β-半乳糖苷酶染色液B	1.5 mL
40754-C	β-半乳糖苷酶染色液C	100 mL
40754-D	β-半乳糖苷酶染色固定液	100 mL
40754-E	X-Gal溶液	5 mL

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2、本試劑盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蝕性和毒性，操作時(shí)請注意小心防護(hù)。

3、細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH值，不能用于細(xì)胞培養(yǎng)的CO₂培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。因?yàn)?/font>CO₂培養(yǎng)箱中較高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

4、40754-B剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀，屬正常現(xiàn)象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色實(shí)驗(yàn)。配置染色工作液時(shí)，也可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會完全溶解。在染色前一定要確保所有的試劑處于完全溶解狀態(tài)。

X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細(xì)胞樣品可以在4ºC冰箱避光保存。

6、本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1. 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：

1.1、染色工作液配制

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒內(nèi)各組分從冰箱內(nèi)取出，徹底溶解。其中X-Gal溶液最好置入冰槽里等待溶化。根據(jù)表1進(jìn)行染色工作液的配置，實(shí)驗(yàn)體系類型，檢測樣本數(shù)，統(tǒng)一配制單次實(shí)驗(yàn)需要的染色工作液總量。

表1 染色工作液配方表

β-半乳糖苷酶染色液A	10 μL
β-半乳糖苷酶染色液B	10 μL
β-半乳糖苷酶染色液C	940 μL
X-Gal溶液	40 μL

【注】配制染色工作液時(shí)需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴(yán)重變形。但是染色過程可以在聚苯乙烯容器內(nèi)進(jìn)行，如細(xì)胞培養(yǎng)常用的6孔板。

【注】為減少樣本染色過程中出現(xiàn)結(jié)晶現(xiàn)象，建議X-Gal使用前可適當(dāng)37℃加熱1-3 h；染色工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，并盡量在15 min內(nèi)用完。

2. 6孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色（貼壁細(xì)胞）：

2.1、吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞1次，加入1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定10~15 min。

【注】對于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

2.2、吸除固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3 min。

2.3、吸除PBS/HBSS，每孔加入1 mL預(yù)熱的染色工作液，覆蓋整個(gè)生長表面。

2.4、37℃孵育過夜，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發(fā)。

【注】37℃孵育不能在CO₂培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

2.5、普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)SA β-gal的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2 mL PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長時(shí)間。

3. 懸浮細(xì)胞染色：

3.1、收集細(xì)胞，2500×g離心10 min收集細(xì)胞至1.5 mL離心管內(nèi)，用PBS/HBSS洗滌1次，加入1 mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15 min。固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。

3.2、2500×g離心10 min，吸除細(xì)胞固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3 min。

3.3、2500×g離心10 min，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1 mL預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1，具體染色工作液總量請根據(jù)樣本類型、樣本數(shù)等進(jìn)行計(jì)算。

3.4、37℃孵育過夜。

【注】37℃孵育不能在CO₂培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

3.5、取部分染色好的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心，去除染色工作液，加入1 mL PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天。也可取細(xì)胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長時(shí)間。