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Hifair? Ultra Reverse Transcriptase (400 U/μL)

品牌：翌圣生物
產(chǎn)地：
供應(yīng)商報(bào)價(jià)：面議

翌圣生物科技(上海)股份有限公司更新時(shí)間：2024-12-24 09:03:45

銷售范圍售全國

入駐年限第1年

營業(yè)執(zhí)照已審核

同類產(chǎn)品逆轉(zhuǎn)錄酶(13件)

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詳細(xì)介紹

Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase是對Hieff^® M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase進(jìn)行基因工程改造的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，該酶缺乏RNase H活性，合成全長cDNA的能力大幅提升，可擴(kuò)增長達(dá)20 kb的cDNA。Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase的熱穩(wěn)定性顯著提高，耐受溫度達(dá)65℃，可對具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板高效逆轉(zhuǎn)錄。與Hieff® M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase相比，Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase具有更高的持續(xù)合成能力及合成速率，同時(shí)增強(qiáng)了耐抑制劑的能力，可有效解決樣品中的抑制劑導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效率低下的問題。

產(chǎn)品組分

編號	組分	產(chǎn)品編號/規(guī)格
編號	組分	14605ES03	14605ES08	14605ES10
14605	Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (400 U/μL)	1 mL	5 mL	10 mL

產(chǎn)品應(yīng)用

全長cDNA文庫構(gòu)建；

終點(diǎn)法PCR；

RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR等。

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸，-20ºC保存，有效期一年。

注意事項(xiàng)

1）請保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；

2）所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行，防止發(fā)生RNA降解；

3）為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本；

4）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅用作科研用途！

第一鏈cDNA合成操作步驟

1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）

組分	使用量
RNase free ddH₂O	to 13 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL
	or 1 μL
	or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng

65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并用移液器輕輕吹打混勻。

2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液配制

組分	使用量
上一步的反應(yīng)液	13 μL
5×Hifair^®Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer (cat#15664)	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (400 U/μL)	200 U
RNase Inhibitor (40 U/µL)	1 μL

3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置

溫度	時(shí)間
25℃	5 min
50℃	15 min
85℃	5 min

【注】：1）當(dāng)使用Random Primers時(shí)，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用50℃。對于高GC含量模板或者復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到55℃-60℃；

3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。

※ 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

HB220901

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