Alkaline Phosphatase Stain Kit堿性磷酸酶染色試劑盒

產(chǎn)品描述

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)是一類(lèi)水解酶，其通過(guò)水解磷酸單酯的作用將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去掉并生成磷酸根離子和自由的羥基。在堿性條件下以核苷酸、蛋白質(zhì)和生物堿等作為去磷酸化作用的底物。該酶是一組同功酶的統(tǒng)稱(chēng)，如小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal AlkalinePhosphatase, CIAP/CIP)被廣泛用于抗體標(biāo)記并最終用于蛋白和核酸的檢測(cè)等，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去單磷酸化)等。

BCIP/NBT是堿性磷酸酶的常用底物，在堿性磷酸酶的作用下BCIP會(huì)被水解，水解產(chǎn)物會(huì)和NBT發(fā)生反應(yīng)形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan物質(zhì)。

本試劑盒可用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酶顯色，包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS的鑒定，也可以用于結(jié)合有堿性磷酸酶的膜的Western顯色檢測(cè)等。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期1年，染色液BCIP和染色液NBT需避光保藏。

注意事項(xiàng)

1）本產(chǎn)品僅限科學(xué)研究。

2）BCIP對(duì)人體有刺激性，NBT對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

染色步驟

1、用合適的洗滌液對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品或膜在與堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體或探針?lè)跤?，洗?-5次，每次3-5 min。對(duì)于檢測(cè)內(nèi)源性堿性磷酸酶的組織或細(xì)胞樣品，在固定后，也用合適的洗滌液洗滌3-5次，每次3-5 min。
2、按照 緩沖液：染色液BCIP：染色液NBT=3 mL: 10 µL:20 µL的比例配制適量體積的AP染色工作液。

3、在最后一次洗滌后去除洗滌液，加入適量AP染色工作液。
4、室溫避光孵育5-30 min或更長(zhǎng)時(shí)間(最長(zhǎng)達(dá)24 h)，直至顯色達(dá)到預(yù)期深淺效果。
5、去除AP染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應(yīng)。
6、對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品，在顯色反應(yīng)終止后如有必要可用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色觀察。對(duì)于膜樣品，顯色反應(yīng)終止后可至室溫晾干避光保存。