成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基

一．產(chǎn)品簡介

CTCC自主研發(fā)的成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，體外誘導(dǎo)MSCs向成脂分化。該培養(yǎng)基包括促進(jìn)MSCs向成脂分化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)質(zhì)量胎牛血清，所需的培養(yǎng)基添加物以及青鏈霉素。

二．包裝組成成分

三．培養(yǎng)器皿表面的明膠包被操作流程

為了避免誘導(dǎo)過程中MSCs出現(xiàn)漂浮現(xiàn)象，建議對成脂誘導(dǎo)使用的培養(yǎng)器皿表面進(jìn)行明膠包被。

1. 加適量1%明膠到培養(yǎng)器皿中，能覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿底面的量即可。
2. 搖勻液體使其覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿的底面。
3. 將鋪有1%明膠的培養(yǎng)器皿放置在超凈臺至少30min。
4. 30 min后棄去明膠，待培養(yǎng)器皿晾干后，即可用于接種細(xì)胞。

包被明膠的培養(yǎng)器皿在無菌和明膠不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。

四．成脂誘導(dǎo)分化操作規(guī)程（以24孔板為例）：

1. 分離原代MSCs后，置于37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2-3天換液或傳代。
2. 建議使用低代次的MSCs（<8代，MSCs隨著傳代后代次的增加，多向潛能也逐漸降低）。細(xì)胞均勻分布，融合度達(dá)到80%時(shí)，用25%Trypsin-EDTA消化傳代。
3. 收集細(xì)胞，按照5X10⁴cells/cm²的細(xì)胞密度接種在預(yù)先用明膠包被的孔板中，每孔培養(yǎng)基600μl，37℃，5%CO₂培養(yǎng)。
4. 待細(xì)胞融合度接近或者達(dá)到100%，開始誘導(dǎo)，小心棄去培養(yǎng)基，加入成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基A。成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基要預(yù)先37℃預(yù)熱并沿壁加入。（需將原瓶培養(yǎng)基分裝至50ml離心管后，對分裝后即將使用的培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)熱）
5. 誘導(dǎo)48h吸走A液，加入37℃預(yù)熱的成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基B液。
6. 再誘導(dǎo)24h后，吸走B液，換回A液誘導(dǎo)。
7. A液和B液交替作用3-5次后（12-20天），繼續(xù)用B液維持培養(yǎng)直至細(xì)胞內(nèi)的油滴足夠大。

為避免成脂誘導(dǎo)不成功或者分化效率低，請盡量保證MSCs純度；不要將培養(yǎng)板長時(shí)間置于培養(yǎng)箱外觀察或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱；誘導(dǎo)培養(yǎng)基一定要預(yù)熱；盡可能地避免晃動(dòng)培養(yǎng)板；嚴(yán)格按照上述規(guī)程操作。

五.干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化實(shí)例

六.QC測試并證明誘導(dǎo)培養(yǎng)基有以下特性：

1. 包含了MSCs向成脂方向分化需要的所有成分。
2. 實(shí)驗(yàn)比較同類產(chǎn)品，油紅染色證明其具有ZJ誘導(dǎo)成脂能力。
3. 無菌檢測證明無細(xì)菌、真菌和支原體
4. 證明無內(nèi)毒素

七.產(chǎn)品使用注意事項(xiàng)：

1. 需避光，2-8℃保存，有效期為1個(gè)月。
2. 所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用。
3. 產(chǎn)品使用前需37℃預(yù)熱。
4. 產(chǎn)品使用時(shí)避光操作。
5. 建議在產(chǎn)品使用時(shí)避光操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、 ZL、 臨床、 家庭及其他用途。