Cebrary?Tissue Digestion Solution 組織消化液

Cebrary^®Tissue Digestion Solution組織消化液（10x）可將生物組織樣本溫和、快速地消化解離為細(xì)胞懸液或細(xì)胞團(tuán)塊，可用于后續(xù)類器官的構(gòu)建和細(xì)胞分離培養(yǎng)。該組織消化液廣泛適用于實(shí)體腫瘤（如腸癌、肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌等）及大部分正常組織標(biāo)本在體外原代培養(yǎng)的消化解離。本品為10x原液，使用前請稀釋。

產(chǎn)品組分

保存方法

-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期 24個(gè)月；稀釋至使用濃度后，-20℃有效期1個(gè)月，2-8℃保存，建議48h內(nèi)使用。

產(chǎn)品應(yīng)用（以腫瘤組織為例）

1. 從冰箱取出組織消化液（10x），恢復(fù)至室溫，上下振蕩數(shù)次混勻。為了盡量減少凍融次數(shù)對產(chǎn)品效果的影響，請按照日常使用量將組織消化液母液分裝后儲(chǔ)存于-20℃。

2. 無菌條件下配制腫瘤組織消化液，本品為母液，使用時(shí)可用DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋，可依據(jù)組織性質(zhì)稀釋8-10倍使用，對較難消化的結(jié)締組織和質(zhì)地堅(jiān)硬的間質(zhì)組織可在使用時(shí)加入終濃度為3mM的CaCl2溶液。

3. 腫瘤組織樣本的消化

1）在消化之前利用手術(shù)剪或手術(shù)刀將腫瘤組織剪切成體積約為1~3 mm³的碎片。

2）根據(jù)原組織塊大小加入適當(dāng)體積的（消化液體積需是原腫瘤組織體積的25-50倍）稀釋好腫瘤組織消化液后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱或恒溫?fù)u床中進(jìn)行組織消化。不同種類腫瘤的樣本，因其組織來源、腫瘤亞型及個(gè)體化差異，其消化所需時(shí)間可能會(huì)有所不同，總體消化時(shí)間在20min-120min。

注意：在此操作過程中須仔細(xì)監(jiān)測消化過程，因?yàn)檫^度消化可能會(huì)對分離細(xì)胞的活性有明顯影響。消化過程中，可以對消化懸液進(jìn)行鏡檢，在鏡下觀察到較多的單個(gè)細(xì)胞或70μm以下的細(xì)胞簇后，即可認(rèn)為消化完成。

3）在確認(rèn)消化完成的組織懸液中加入胎牛血清（FBS）至終濃度達(dá)2-5%或終濃度為0.1%的BSA后吹打混合均勻以終止消化。

4）上步驟所獲得消化懸液可直接用于離心或篩網(wǎng)過濾等細(xì)胞分離操作，在使用分離的細(xì)胞前需利用類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基對樣本進(jìn)行兩次以上的離心清洗方可使用（推薦水平離心速度200-300g離心3-5min）。

注意事項(xiàng)

1.  使用時(shí)，請注意無菌操作， 避免接觸污染；

2.  樣品首次溶解后，可進(jìn)行分裝，避免反復(fù)凍融。

Ver.CN20231029