SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate持久性化學(xué)發(fā)光底物

1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或者HRP標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)最終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。

2. 最后一次洗膜的同時，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。

【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭。

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液（100~200μl發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3-5分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。。

【注】：孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低發(fā)光液使用比例。

4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜完全干燥。不可洗去

發(fā)光液。

5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。

6. 暗房內(nèi)取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，分別曝光不同的時間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘，定影顯影沖洗。

【注】：曝光時間需根據(jù)曝光強(qiáng)度做相應(yīng)的調(diào)整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時壓片。

注意事項

1. 步驟1~5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。
2. 長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
3. 發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1~10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
4. 推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:50000，二抗1:50,000-1:250,000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
5. 某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
6. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
7. 使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
8. 使用生物素-親和素系統(tǒng)，避免使用牛奶封閉，可能會導(dǎo)致背景過高。
9. 疊氮化鈉（NaN₃）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN₃，如必需使用勿超過0.01%。
10. 金屬氧化物顆?？赡軙斐赡ど铣霈F(xiàn)顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。
11. 本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。
12. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
13. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240724