雞新城疫抗體檢測試劑盒（間接法）

一、雞新城疫抗體檢測試劑盒

通用名：雞新城疫病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Newcastle Disease Virus (ELISA)

二、包裝規(guī)格   96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒

三、預期用途   雞新城疫是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一種高度接觸性傳染病，又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟。主要特征是呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊亂、粘膜和漿膜出血。

雞新城疫抗體試劑盒適用于雞血清中新城疫病毒特異性抗體的檢測，可用于雞新城疫疫苗免疫效果評價。

四、試劑盒原理

雞新城疫抗體試劑盒系由預包被新城疫病毒（NDV）抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中新城疫病毒特異性抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有新城疫病毒的特異性抗體，則將與酶標板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。

五、雞新城疫抗體檢測試劑盒組成

酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

?【樣品準備】

1.血清/血漿：取動物全血按常規(guī)方法制備血清或血漿，要求血清/血漿清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。

2.待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本恢復室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl待檢樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?0分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。